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本制品是在nFect^PM原代细胞小RNA转染试剂的基础上加以改进研发成功的专门用于悬浮细胞小核酸转染的试剂。nFect^SP可用来转染siRNA、miRNA mimics、miRNA inhibitor等200bp以内的小分子RNA，可转染绝大多数悬浮细胞。

悬浮细胞的核酸转染都是个热点难题，市场上真正有效的商品化的悬浮细胞小RNA转染试剂并不多。nFect^SP能够高效转染绝大多数悬浮细胞，获得比较理想的基因敲除效果。对于大多数悬浮细胞，nFect^SP的细胞转染阳性率都在75%以上，而转染细胞死亡率不到10%。nFect^SP的使用也极其简便，先将sRNA与nFect^SP室温混合，再将siRNA-nFect^SP混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。

• 悬浮细胞转染性能：细胞转染阳性率一般在75%以上，基因敲除效率在80%以上；
  
• 极低的细胞毒性：转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；
  
• 转染细胞范围广，绝大多数悬浮细胞都能获得比较理想的转染结果。

组分	0.1mL	0.5mL	1mL	1.5mL
悬浮细胞小RNA转染试剂	0.1mL	0.5mL	1mL	1.5mL
说明书	1份

保存：-20℃，避光，避免反复冻融，有效期1年。

注意事项:

• 悬浮细胞转染难度较大，首次转染时，请务必对转染条件进行优化。例如：24孔培养板，可进行如下交叉实验：
  

  nFectSP	siRNA(pmol)
  2μL	20、30、40、50
  3μL	20、30、40、50
  4μL	20、30、40、50

  
  
• 转染时，细胞生长状态应保持良好，密度不能过大，培养液尽量不要使用抗生素，否则会导致细胞死亡增加。
  
• 为了提高转染效率，转染后培养板可放于微型振荡器上培养或每隔1小时人工晃动1次。

本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。

• 细胞接种：
  转染前一天接种细胞，接种细胞量2～3×10⁵，每孔500μL培养基，转染前细胞生长状态保持良好，尽量不要使用抗生素。
  
• siRNA-nFect^SP混合物准备：
  
  • 30pmol siRNA用50μL无血清培养基稀释。
    
  • 2μL nFect^SP用50μL无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育5min。
    注意：确保在25min内执行第三步操作，不要过于延迟。
    
  • 孵育5min后，将siRNA稀释液与nFect^SP稀释液混合（总体积100μL）。轻轻混匀，室温孵育20min。
• 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）：
  
  • 将100μL混合物加入培养孔内，培养孔内含有0.5mL培养的细胞。轻轻晃动培养板5min，混匀。
    
  • 37℃培养24-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。

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